液相色譜是打開未知物質(zhì)世界的大門。科研中的很多問題都能在色譜圖中很好地反映出來。有些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)來解決，而有些問題必須通過操作程序來修改。畢竟，選擇合適的色譜柱和流動(dòng)相是獲得良好色譜的關(guān)鍵。

　　在液相色譜分離過程中，我們經(jīng)常會(huì)遇到六個(gè)常見的問題。每一個(gè)問題都可以通過使用適當(dāng)?shù)姆椒▉黹_發(fā)策略和工具來避免。

　　一、峰尾

　　峰值拖尾

　　1.屏幕被擋住了

　　如果色譜柱兩端的濾網(wǎng)堵塞，樣品會(huì)在篩板中堵塞形成延遲，樣品在柱后流出時(shí)峰形會(huì)形成尾部。可以通過反吹塔或更換篩板來解決。

　　2.折疊列

　　是指色譜柱因其他原因失去柱效，無法保留物質(zhì)，使物質(zhì)不停留在固定相上，隨流動(dòng)相流出，但仍有一點(diǎn)柱效，從而形成拖尾。可以通過重新加載或替換列來解決。

　　3.污染

　　樣本不在同一條起跑線上，從后面跑到最后，露出尾巴。更換色譜柱或用有機(jī)溶劑梯度沖洗色譜柱1小時(shí)以上即可解決。

　　4.流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤

　　如果某些樣品在一定的pH值下，分子型和離子型之間存在動(dòng)態(tài)平衡，那么離子型會(huì)逐漸向分子型呈現(xiàn)拖尾。調(diào)節(jié)pH值可以抑制分子解離，改善拖尾現(xiàn)象。對于堿性化合物，相對較低的pH值更有利于獲得對稱的峰。

　　二、高峰前

　　高峰前

　　1.樣本過載

　　保留的樣品在正常峰前持續(xù)釋放，形成前峰，從而降低樣品含量。

　　2.溶劑選擇不當(dāng)

　　當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力遠(yuǎn)強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)，會(huì)出現(xiàn)峰鋒。例如，反相色譜中使用腈作為樣品溶劑時(shí)，流動(dòng)相的洗脫能力較弱。峰鋒會(huì)出現(xiàn)。這個(gè)問題可以通過選擇流動(dòng)相或相似比例的流動(dòng)相作為樣品溶劑來解決。

　　3.立柱損壞

　　柱效損失，無物料滯留。只能通過更換色譜柱來解決。

　　4.一個(gè)小峰出現(xiàn)在大峰之前，也就是想象中的鋒峰。即小峰埋在大峰之前，可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫梯度來解決。

　　第三，基線漂移

　　基線漂移

　　1.柱溫波動(dòng)

　　即使很小的溫度變化也會(huì)引起基線波動(dòng)，這通常會(huì)影響差分探測器、電導(dǎo)探測器、低靈敏度紫外探測器或其他光電探測器。可以通過使用柱溫箱和在檢測器前使用熱交換器來控制柱溫度和流動(dòng)相的溫度來解決。

　　2.不均勻流動(dòng)相

　　條件變化引起的基線漂移大于溫度引起的基線漂移。可以用HPLC級溶劑解決，流動(dòng)相使用前要脫氣。

　　3.流動(dòng)池被污染或有氣體

　　用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流動(dòng)池。如有必要，使用1N硝酸(不要使用鹽酸)。4.流量比或流量變化不當(dāng)

　　比例或流量。為避免此問題，請定期檢查流動(dòng)相的成分和流速。

　　5.樣本中有強(qiáng)烈的保留意見

　　芋頭峰以逐漸增加的基線形式洗脫。這可以通過使用保護(hù)柱來解決。如有必要，在進(jìn)樣之間或分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑清洗色譜柱。

　　第四，更寬的山峰

　　更寬的山峰

　　1.由于色譜柱污染或失效，塔板數(shù)減少：更換相同類型的新色譜柱。如果新色譜柱提供對稱的峰，用強(qiáng)溶劑清洗舊色譜柱。

　　2.色譜柱與檢測器之間的管道過長或管道內(nèi)徑過大：更換內(nèi)徑較小的短管道。

　　3.檢測器對反應(yīng)時(shí)間或池體積的過度響應(yīng)可以通過縮短響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流動(dòng)池來解決。

　　五.基線噪音

　　基線噪聲

　　1.流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣(尖峰):確保對流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，并沖洗系統(tǒng)以去除檢測器或泵中的空氣。

　　2.泄漏：檢查管接頭是否松動(dòng)，泵是否泄漏，是否有鹽析和異響。如有必要，更換泵密封件。

　　3.流動(dòng)相混合不充分：用手或使用低粘度溶劑充分混合。

　　4.溫度影響(柱溫過高或檢測器未加熱):使用柱溫箱降低溫差或增加換熱器。

　　5.同一線路上的其他電子設(shè)備(意外噪音):斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自外部，并進(jìn)行校正。使用精密穩(wěn)壓電源。

　　第六，決議不夠充分

　　分辨率不足

　　1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理：優(yōu)化梯度洗脫程序。

　　2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(導(dǎo)致保留時(shí)間改變):重新配置流動(dòng)相。

　　3.保護(hù)柱或分析柱堵塞：取下保護(hù)柱進(jìn)行分析，必要時(shí)更換；如果分析柱堵塞，可以進(jìn)行反沖洗；如果問題持續(xù)存在，色譜柱可能會(huì)被強(qiáng)烈殘留的污染物損壞。再生計(jì)劃；如果問題仍然存在，可能是入口堵塞。嘗試更換入口處的濾網(wǎng)或更換色譜柱。